Βήματα σύνθεσης πεπτιδίων

Ζυγίστε 2,0 g τυφλή ρητίνη Wang σε έναν καθαρό και στεγνό σωλήνα αντίδρασης, προσθέστε 15 mL DMF, Ενεργοποίηση σε θερμοκρασία δωματίου 30 λεπτά περίπου.

Σε θερμοκρασία δωματίου, διηθήστε τον διαλύτη από το προηγούμενο βήμα μέσω ενός πυρήνα άμμου και προσθέστε 1 mmol 5 γραμμομοριακή περίσσεια C Πρώτο αμινοξύ στο τέλος, 5πλάσια μοριακή περίσσεια DMAP, 5 μοριακή περίσσεια DIC, DMF Αντίδραση σε θερμοκρασία δωματίου διαλύτη 3 ώρες. Χρήση μετά την ολοκλήρωση της αντίδρασης DMF Wash 4 ~ 6 φορές, 5-6 φορές κάθε φορά mL. Στη συνέχεια, προσθέστε μια κατάλληλη ποσότητα πυριδίνης και οξικού ανυδρίτη με αναλογία όγκου 1:1 και αντιδράστε για 30 λεπτά. Χρήση μετά την ολοκλήρωση της αντίδρασης DMF Wash 4 ~ 6 φορές, 5-6 φορές κάθε φορά mL. (επίδραση: Αποκλείστε τις ενεργές μικροκουκκίδες στην κενή ρητίνη που δεν αντιδρά.)

Αφαιρέστε τον διαλύτη από το προηγούμενο βήμα με διήθηση με αναρρόφηση και προσθέστε 10 mL 20% πιπεριδίνης DMF. Το διάλυμα προστίθεται στη ρητίνη, N2 Αναδεύστε 10 λεπτά Τέλος, διηθήστε το διάλυμα και προσθέστε 10 mL 20% διαλύματος πιπεριδίνης DMF, N2 εμφύσηση και αναδεύστε 5 λεπτά. DMF Πλύση 4 φορές, πλύση 2 φορές με μεθανόλη, 5-6 φορές κάθε φορά mL.

Βγάλτε μια μικρή ποσότητα ρητίνης, πλύντε την τρεις φορές με μεθανόλη, προσθέστε νινυδρίνη, KCN, Μία σταγόνα διαλύματος φαινόλης, 105 βαθμοί – 110 μοίρες Θέρμανση 5 λεπτά, Το να γίνει σκούρο μπλε είναι θετική αντίδραση, υποδεικνύοντας ότι η αφαίρεση έχει ολοκληρωθεί και το επόμενο βήμα της αντίδρασης μπορεί να πραγματοποιηθεί. Εάν είναι άχρωμο, σημαίνει ότι η προστατευτική ομάδα δεν έχει αφαιρεθεί εντελώς και η παραπάνω λειτουργία αποπροστασίας πρέπει να επαναληφθεί.

Ζυγίστε 3 φορές γραμμομοριακή περίσσεια C Το δεύτερο αμινοξύ στο τέλος, 3πλάσια μοριακή περίσσεια HBTU και 3πλάσια μοριακή περίσσεια HOBT Στο σωλήνα αντίδρασης, προσθέστε την κατάλληλη ποσότητα DMF Αφού διαλυθεί πλήρως το διάλυμα, προσθέστε 10πλάσια γραμμομοριακή περίσσεια (καθαρή) DIEA, αντίδραση σε θερμοκρασία δωματίου 40 φορές κάθε φορά Wash, χρήση 40 φορές Wash. mL. Πάρτε μια μικρή ποσότητα ρητίνης χρησιμοποιήστε Δοκιμή με αντιδραστήριο ανίχνευσης νινυδρίνης και θα εμφανιστεί άχρωμο, στη συνέχεια προσθέστε 10 mL 20% πιπεριδίνης DMF Αφαίρεση διαλύματος Fmoc, Κάνετε αυτό δύο φορές για 10 λεπτά, 5 λεπτά, μετά τη χρήση DMF Πλύνετε 4 φορές, πλύνετε 2 φορές με μεθανόλη, 5-6 φορές κάθε φορά mL. Βγάλτε μια μικρή ποσότητα ρητίνης χρησιμοποιήστε Χρησιμοποιήστε το αντιδραστήριο ανίχνευσης νινυδρίνης για να την εντοπίσετε. Εάν η ανίχνευση είναι μπλε, μπορείτε να προχωρήσετε στο επόμενο βήμα της αντίδρασης.

Τέλος, χρησιμοποιήστε διάλυμα κοπής τριφθοροξικού οξέος (95% TFA:2% TIS:2% EDT:1% H2O) Κόψτε 2 ώρες, Διηθήστε το διάλυμα της αντίδρασης με αναρρόφηση και λάβετε ένα διάλυμα τριφθοροξικού οξέος του πολυπεπτιδίου. Ξηράνετε το προϊόν λύσης με άζωτο όσο το δυνατόν περισσότερο, κατακρημνίστε με αιθέρα, φυγοκεντρήστε και στη συνέχεια πλύνετε με αιθέρα για 3 δευτερόλεπτα. ~ 5 φορές, ελήφθη ένα λευκό στερεό. Μετά τη διάλυσή του σε καθαρό νερό, αφαλατώστε με HPLC και καθαρίστε,{11}}στεγνώστε και κατακρημνίστε τους κρυστάλλους, λάβετε μια μικρή ποσότητα ανάλυσης MS.